TOXOPLASMA GONDII : Efficacité de l’atovaquone combinée avec la clindamycine contre les kystes résiduels

samedi 19 janvier 2013
par  Dr Moatassime
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Efficacité de l'atovaquone combinée avec la clindamycine contre l'infection murin avec un kystogène (ME49) souche de Toxoplasma gondii

  1. Jelica Grujić

+Affiliations des auteurs

  1. Toxoplasmose Laboratoire de recherche, Institute for Medical Research, PO Box 102, 11129 Belgrade, Yougoslavie

Abstrait

L'efficacité de l'atovaquone (ATO) combinée avec la clindamycine (CLI) contre Toxoplasma gondii a été examinée dans des modèles murins d'infection avec une souris non-virulente (ME49) souche. Swiss-Webster souris inoculées par voie orale avec 10 ou 20 kystes ont été traités avec l'OAB et CLI seul ou combiné à des doses de ATO 5-100 et 25-400 mg CLI / kg / jour pendant 2-4 semaines. Le traitement médicamenteux a été initié (i) le jour 4 post-infection (infection aiguë), (ii) 3 mois après l'infection (infection chronique) et (iii) à la suite d'un cours de 2-3 semaines de traitement avec la dexaméthasone (DXM) seul ou combiné avec de la cortisone-acétate (CA) a introduit trois mois après l'infection (toxoplasmose réactivée). En cas d'infection aiguë, tandis que le traitement avec un médicament ou une combinaison de médicaments de survie significativement améliorée et réduit la charge kyste au cerveau, chez les souris traitées avec l'OAB seul ou combiné avec CLI, les compter les kystes étaient significativement plus faibles que chez les souris traitées avec CLI seul. En cas d'infection chronique, la diminution de la charge kyste observé 2 semaines après le traitement par l'autre médicament seul était significative uniquement chez les souris traitées avec les médicaments combinés. Plus important encore, la toxoplasmose réactivée, alors que l'effet des drogues combinées a été montré chez la souris supprimés à la fois DXM seul et combiné avec CA, chez des souris prétraitées avec DXM un cours de 3 semaines de ATO ≥ 25 et CLI 50 mg / kg / jours significativement augmenté la survie et nettement diminué le fardeau kyste. Ce dernier effet est à long terme, puisque les charges de kystes chez les souris traitées a continué à diminuer jusqu'à 3 mois plus tard, alors qu'ils ont augmenté dans les souris non traitées. Les résultats justifient une évaluation clinique de la combinaison de l'OAB et de la CLI dans le traitement de la toxoplasmose dans les deux immunocompétent et, plus important encore, les malades immunodéprimés.

Reçu le 21 Janvier 2002; retourné 13 mai 2002; révisé le 21 Juin 2002; accepté le 16 Septembre 2002

Introduction

La pandémie du sida et l'utilisation de traitements immunosuppresseurs intensifs pour une variété de conditions, y compris avant et après transplantation d'organes et de tissus, ont mis en place une population d'individus immunodéprimés sujettes à la réactivation de pathogènes opportunistes, y compris Toxoplasma gondii , en particulier dans les zones géographiques à forte l'exposition à ce protozoaire. Chez les patients atteints du SIDA, T. gondii est apparue comme la principale cause de lésions cérébrales focales, le plus souvent présenté comme l'encéphalite toxoplasmique (TE). 1 Puisque les traitements disponibles ne permettent pas d'éliminer le parasite de l'hôte infecté, le traitement d'un épisode TE doit être suivi par l'entretien long de la vie thérapie.Cependant, le traitement standard avec la pyriméthamine et la sulfadiazine est associée à une toxicité considérable, nécessitant souvent l'arrêt des médicaments. 2 , 3 En conséquence, de nouvelles thérapies sont absolument nécessaires. L'évaluation d'un certain nombre de médicaments connus et nouvellement développés et les combinaisons de médicaments a conduit au concept de la thérapie combinée que la stratégie actuelle de choix pour le traitement de la toxoplasmose dans ce cadre. 4

L'atovaquone hydroxynaphtoquinone (ATO) semble être actif non seulement contre les tachyzoïtes, mais aussi contre bradyzoïte contenant T. gondii kystes. 5 mitochondrial cytochrome b a récemment été identifié comme cible pour l'OAB à T. gondii . 6 ATO a été montré pour être efficace dans des modèles animaux d'infection, seuls 7 - 10 ou en combinaison avec d'autres médicaments tels que la pyriméthamine et la sulfadiazine, 11 ou rifabutine, 4 , 12 . et est utilisé de plus en plus dans la thérapie humaine 13 - 15 Nous avons présenté un rapport sur ​​l'activité synergique de l'OAB et la clindamycine (CLI), un médicament largement utilisé alternatif 16 , 17 avec bien établie anti- T. gondiiactivité, 18 - 21 dans la toxoplasmose murine induite avec la souris virulente (type-1) souche RH de T. gondii . 22 Toutefois, puisque le type-2 compte pour 65% des souches de cas de réactivation de la toxoplasmose au cours du SIDA, 23 dans le présent rapport, nous présentons des données sur l'anti- T. gondii efficacité de l'OAB et de l'infection murine CLI induite par ME49 comme un typique type-2 souche, y compris un modèle de T. gondii recrudescence.

Matériels et méthodes

Souris

Femme Swiss-Webster souris (Military Medical Academy Fonds pour la recherche animale, Belgrade, Yougoslavie), 6 semaines, pesant 18-22 g au début des expériences, ont été utilisés. Les souris ont été logées en eau potable de cinq ou six par cage (selon l'expérience) et a offert et régulière de la souris alimentation ad libitum , sauf indication contraire.Toutes les études sur les animaux ont été réalisés avec l'approbation d'un local (Institute for Medical Research) comité d'éthique.

Parasites

Kystes cérébraux de la souche ME49 de T. gondii (initialement prévue par le Dr JP Dubey, Beltsville, MD, USA), régulièrement entretenue par le passage à travers la Suisse-Webster souris deux fois par an, ont été utilisés pour établir une infection chronique. Pour obtenir des kystes pour les infections expérimentales, des souris infectées au moins 8 semaines auparavant ont été tués par asphyxie dans le chloroforme et leur cerveau prélevé et homogénéisé dans un homogénéisateur en téflon avec 1 ml de solution saline chacun. Pour le dénombrement kyste, 25 ul des suspensions de cerveau a été placé sur des lames de microscope et comptés. Le nombre de kystes par cerveau a été calculée en multipliant le nombre compté dans quatre gouttes par 10, ce qui donne un seuil de sensibilité de 10 kystes par le cerveau. Pour les infections expérimentales, les souris ont été inoculées frais par gavage intraoesophageal avec 250 uL de suspension du cerveau évaluées pour contenir 10 ou 20 kystes. Dans notre expérience, l'inoculation de 10 kystes produit l'infection uniforme, sans mortalité, tandis que l'inoculation des résultats ≥ 20 dans les kystes de mortalité; 24 donc, pour tenir compte des différences dans la survie après le traitement précoce de médicaments, des inoculums de 20 kystes ont été utilisés pour développer une infection aiguë, alors que 10 kystes ont été inoculés à établir une infection chronique.

Médicaments

ATO (poudre micronisée, beaucoup 291604A, Glaxo Wellcome, Stevenage, Royaume-Uni, aimablement fourni par le Dr Simon Lister) a été administré à poids de 5, 25, 50 et 100 mg / kg par jour.

CLI (poudre de chlorhydrate de CLI, beaucoup 353YS; Upjohn, fourni par Yusapharm, Belgrade, Yougoslavie) a été administré à 25, 50 et 400 mg / kg / jour.

Sur la base de l'observation que des souris consomment 4 g de nourriture par jour, 18 , 20 les dosages souhaités ont été obtenus en ajoutant ATO 0,025, 0,125, 0,25 et 0,5 mg et CLI 0,125, 0,25 et 2,0 mg, respectivement, pour 1 g de d'alimentation de la souris sol. Aliments frais ont été fournis chaque jour.

Ces dosages ont été sélectionnés sur la base de travaux antérieurs 7 , 12, 18 , 19 , 21 aussi efficace (ATO 100 et CLI 400 mg / kg / jour) ou, pour mieux révéler les effets de la thérapie combinée, comme sous-optimale (tous inférieurs doses des deux médicaments).

Pour contrôler les effets secondaires des médicaments, dans un essai préliminaire, des groupes séparés de souris ont reçu ATO (100 mg / kg / jour) et CLI (400 mg / kg / jour) pendant 3 semaines et ATO + CLI (100 400 mg / kg / jour) pendant 2 semaines. Aucune toxicité cliniquement significative (fourrure ébouriffée, la léthargie, la perte de poids) a été observé sur une période de 3 mois.

Dexaméthasone phosphate de sodium (DXM; ICN Galenika, Belgrade, Yougoslavie) a été administré à une posologie de 2,5 mg / kg / jour par souris, obtenue en dissolvant 5 mg de DXM par 1 L d'eau potable. L'eau traitée et non traitée a été changé trois fois par semaine.

Hydrocortisone-21-acétate (CA, 87494 lot;. ICN Biomedicals, Aurora, OH, USA) a été administré à 50 mg / kg par voie sous-cutanée trois fois par semaine.

Co-amoxiclav (Panklav; Panfarma, Belgrade, Yougoslavie) a été donné dans l'eau potable à 1 g / L pour la période d'administration de DXM et CA pour prévenir la surinfection bactérienne.

Dispositif expérimental

Modèle d'infection aiguë. Deux expériences distinctes ont été réalisées.Des groupes de souris ( n = 15-20) inoculés avec 20 kystes ont été arbitrairement attribué au traitement par l'OAB et de la CLI de la manière suivante: ATO 100 et CLI 400 mg / kg / jour, seul et combiné (expérience 1); ATO 25 et CLI 50 mg / kg / jour, seul et combiné (expérience 2), ou elle n'est pas traitée pour servir de témoins. Dans les deux expériences, le traitement a été initié jour 4 post-infection et a continué pendant 14 jours consécutifs. Les souris ont été observées pendant 30 jours après la fin du traitement, à quel point les survivants ont été tués et les cerveaux enlevés et kystes comptés comme décrit ci-dessus.

 

L'infection chronique par le modèle. groupes de souris ( n = 15) inoculés avec 10 kystes trois mois auparavant ont été arbitrairement assignés à un traitement par ATO 100, 400 et CLI ATO + CLI 100 400 mg / kg / jour pendant 14 jours consécutifs ou elle n'est pas traitée en tant que contrôles. Quatorze jours après la fin du traitement, ils ont été tués et traitées comme ci-dessus.

 

Modèle d'infection chronique chez l'hôte immunodéprimé (toxoplasmose réactivée). DXM et CA ont été utilisés pour induire une immunosuppression chez les souris chroniquement infectées. Le choix des schémas thérapeutiques de corticoïdes était basée sur nos travaux précédents, 24 qui a montré que DXM, mais pas seulement CA, induit une immunosuppression conduit à une recrudescence de T. gondii dans l'infection latente précédemment. Cependant, l'ajout de CA à DXM potentialise l'effet immunosuppresseur de DXM. Maladie cliniquement manifeste suivie par la mortalité commence au bout de 2 semaines et continue pendant toute la durée de l'administration de corticoïdes. Ainsi, dans l'expérience 1, les groupes de souris ( n = 12) inoculés avec 10 kystes trois mois auparavant ont été arbitrairement donnée DXM seul ou combiné avec CA pendant 3 semaines, puis traité avec ATO + CLI 5 +25 et 50 +50 mg / kg / jour pour les 4 prochaines semaines.Immédiatement après la fin du traitement, les kystes cérébraux ont été récoltées à partir des survivants. Dans l'expérience 2, des groupes de souris infectées de façon chronique ( n = 18) ont été prétraitées avec DXM pendant 14 jours, puis arbitrairement donnée ATO + CLI 25 +50, 50 +50 et 100 400 mg / kg / jour pendant 3 semaines. Cinq souris de chaque groupe de traitement ont été tués immédiatement après la fin du traitement et examinés pour charges kyste au cerveau, alors que les souris restantes ont été observés pour les 12 prochaines semaines, au cours de laquelle le temps (120 jours après le début du traitement immunosuppresseur) les survivants ont été tués et traitée comme ci-dessus.

Dans tous les modèles, les souris ont été suivies quotidiennement et décès ont été enregistrés. Chez les souris meurent au cours des expériences, ainsi que ceux qui survivent la période d'observation tel que spécifié dans le modèle respectif, cerveau charges parasitaires ont été déterminés comme décrit ci-dessus.

Essais biologiques

Si aucun des kystes ont été observés dans au moins quatre échantillons d'une préparation du tissu cérébral, le reste de l'homogénat de cerveau a été inoculé par voie orale en deux souris frais par échantillon (~ 450 ul chacun). Les souris ont été tués au bout de 6 semaines et les tissus du cerveau examinées pour la présence de kystes cérébraux.

L'analyse statistique

Les taux de survie à des groupes particuliers ont été estimés par la méthode de Kaplan-Meier et comparées produit limite par le log-rank (deux courbes) et des échantillons multiples (trois ou plusieurs courbes) des tests. Les différences dans le nombre de kystes entre les groupes ont été examinés par l'étudiant t -test. Le niveau de signification statistique était P = 0,05.

Résultats

Modèle d'infection aiguë

Les effets d'un cours de 2 semaines de traitement avec l'OAB et CLI initiée jour 4 post-infection ont été suivis par 7 survie semaine, ainsi que par les charges kyste au cerveau au moment de la mort ou à la fin de la période d'observation. En comparaison avec la survie chez les souris non traitées de 60% ​​et 65%, respectivement, dans les expériences 1 et 2 toutes les souris traitées ont survécu significativement mieux. Le traitement avec les plus faibles doses de médicaments administrés seuls (ATO 25 et CLI 50 mg / kg / jour) a protégé 93% ( P = 0,043 et 0,047, respectivement) chez la souris, alors que les doses plus élevées de chaque médicament seul (ATO 100 et CLI 400 mg / kg / jour), ainsi que les deux combinaisons (ATO + CLI 25 50 et 100 400 mg / kg / jour), la protection offerte à pratiquement toutes les souris ( P = 0,003).

En outre, le traitement nettement réduit le nombre de kystes (figure 1 ).Cependant, des différences importantes entre les effets de l'OAB et CLI ont été observées. Bien que, par rapport aux souris non traitées, les charges ont été réduites de kystes chez les souris traitées avec CLI, avec des différences significatives ( P = 0,027) que dans l'expérience 2.D'autre part, dans les deux expériences, les charges de kystes chez les souris traitées avec l'OAB à la fois seul et combiné avec CLI étaient significativement plus faibles que chez les souris non traitées ( P<0,0001) et les souris traitées avec CLI seule ( P = 0,0002 et 0,0008, respectivement , dans l'expérience 1 et P = 0,0044 et 0,005, respectivement, dans l'expérience 2). Cependant, il n'y avait aucune différence dans les deux expériences entre les effets des deux seuls ATO et combiné avec CLI ( P > 0,05).

Figure 1.  kystes du cerveau (moyenne ± ÉCART-TYPE ) chez la souris une infection aiguë avec 20 kystes de la souche ME49 de T. gondii traités avec l'OAB et CLI seul (100 ou 25 et 400 ou 50 mg / kg / jour, respectivement) ou combiné (AC1 et AC2, 100 400 et 25 50 mg / kg / jour, respectivement) à partir de 4 jours post- infection pendant 14 jours. Les kystes ont été récoltées 7 semaines après l'infection. De contrôle non traités, des souris infectées. * P<0,05; ** P <0,01 et *** P . <0,001 par rapport à des souris témoins XX P <0,01 et XXX P <0,001 versus CLI seul.

 

Fait intéressant, aucun des kystes cérébraux ont été observées à l'examen direct du tissu cérébral dans huit souris traitées (deux traités avec ATO 25, l'un traité par ATO 100, l'un traité par CLI 400, deux groupes traités avec ATO + CLI 25 +50 et deux groupes traités avec ATO + CLI 100 400 mg / kg / jour). Cependant, inoculation de ces homogénats de cerveau des souris a donné lieu à de nouvelles T. gondiikystes dans pratiquement tous les cas, ce qui indique qu'aucun traitement médicamenteux a été en mesure d'éradiquer l'infection.

Modèle d'infection chronique

Chez les souris infectées de façon chronique, qui ont tous survécu à travers l'expérience traitées ou non, 2 semaines après la fin d'un cours de 2 semaines de traitement avec ATO 100 et CLI 400 mg / kg / jour seulement, le fardeau de kystes sont pas significativement ( P > 0,05 ) diminue, c'est à dire à 75,9% et 76,4%, respectivement, de ceux des souris non traitées (figure 2 ). Cependant, par rapport aux souris non traitées, le traitement par ATO combiné avec CLI réduit le fardeau kyste de façon significative ( P = 0,033). En comparaison avec les souris traitées avec l'OAB et CLI seul, le fardeau kyste chez les souris traitées avec les médicaments combinés a été abaissé à 43% seulement, bien que cette différence ne soit pas significative, il est venu près ( P = 0,055 et 0,078, respectivement).

Figure 2.  kystes du cerveau (moyenne ± ÉCART-TYPE ) chez les souris chroniquement infectées avec 10 kystes de la souche ME49 de T. gondii trois mois auparavant, traité avec l'OAB et CLI seul (100 et 400 mg / kg / jour, respectivement) ou combinée (100 400 mg / kg / jour) pendant 14 jours. On a récolté les kystes 2 semaines après la fin du traitement. Ø, de contrôle (non traités infectés) chez la souris. * P <0,05 par rapport à des souris témoins.

 

Modèle de la toxoplasmose réactivée

Dans l'expérience 1, les souris infectées de façon chronique pré-traitées avec DXM seul ou combiné avec CA pendant 3 semaines ont été soumis à un stage de 4 semaines de traitement avec des combinaisons de ATO + CLI 5 +25 et 50 +50 mg / kg / jour. Toutes les souris non traitées immunodéprimés à la fois DXM et CA succombé à l'infection par le jour 43, alors que 18% des personnes supprimées avec DXM seul a survécu à la période d'observation (Figure 3 ). Par rapport à ces souris, traités avec ATO + CLI 5 25 mg / kg / jour n'ont pas survécu à une meilleure (0% et la survie de 18%, respectivement, pour le DXM + CA et DXM prétraités groupes). En revanche, le traitement à 50 +50 mg / kg / jour amélioré la survie des souris soumises à un régime répressif à 30%. Toutefois, les probabilités de survie attendus ne varie pas significativement, soit parmi tous les groupes confondus ( P = 0,2919, test de l'échantillon multiple) ou entre les deux groupes ( P > 0,05). De même, bien que les charges (kyste chez toutes les souris meurent au cours de la période de traitement / observation ou de survivants tué à la fin de l'expérience) (figure 4 ) ont diminué par rapport aux souris non traitées de chaque régime répressif, chez les souris traitées avec ATO + CLI 5 25 mg / kg / jour en deux fois (à 59,2% et 46,4% des valeurs de contrôle) et même par quatre fois chez les souris traitées avec ATO + CLI 50 +50 mg / kg / jour (à 27,2% et 23,1% des valeurs de contrôle), ces différences ne sont pas significatives, évidemment en raison des forts écarts-types dans les souris non traitées. Pourtant, la réduction des kystes induite par la combinaison des doses plus élevées (50 +50 mg / kg / jour) chez des souris de chaque régime répressif était proche significative par rapport aux témoins respectifs (DXM + CA, P = 0,07; DXM, P = 0,058 ).

Figure 3.  Effet d'un cours de 4 semaines de traitement avec des combinaisons de ATO et CLI (5 +25 et 50 +50 mg / kg / jour) sur la survie (Kaplan-Meier) de souris infectées de façon chronique immunodéprimés avec DXM seul (ouvert symboles) ou combinés avec CA (symboles pleins) pendant 3 semaines.L'infection chronique a été établie par l'inoculation de 10 kystes de la souche ME49 de T. gondii 3 mois avant le traitement immunosuppresseur.

 

Figure 4.  kystes du cerveau (moyenne ± ÉCART-TYPE ) chez des souris immunodéprimées infectées de façon chronique avec DXM seul ou combiné avec CA pendant 3 semaines et traités avec des combinaisons de ATO et CLI (5 +25 et 50 +50 mg / kg / jour) pendant 4 semaines . L'infection chronique a été établie par l'inoculation de 10 kystes de la souche ME49 de T. gondii 3 mois avant le traitement immunosuppresseur. De contrôle, non traités infectés par des souris immunodéprimées.

 

De toute évidence, une suppression 3 semaines avec DXM à la fois seul et combiné avec CA induite par la recrudescence de T. gondii qui était difficile à traiter, en particulier avec de faibles doses de ATO + CLI (5 25 mg / kg / jour), même si administrés pour aussi longtemps que 4 semaines. Etant donné que dans le modèle d'infection aiguë d'un bon effet de ATO combiné avec CLI a été démontré lorsque la dose de ATO était d'au moins 25 mg / kg / jour, une dernière expérience a été réalisée dans laquelle des souris prétraitées avec DXM pendant seulement 2 semaines ont été traités avec ATO + CLI 25 +50, 50 +50 et 100 400 mg / kg / jour pendant 3 semaines. Les souris ont été observées pendant 120 jours après le début du traitement immunosuppresseur. En comparaison avec le taux de survie de 9% en non traitées des souris immunodéprimées (figure 5 ), la survie de traitement considérablement améliorée, avec des taux de protection allant de 55% à 67%, selon le schéma thérapeutique ( P <0,05 pour tous les groupes, test du log rank). D'un autre côté, il n'y avait pas de variations significatives entre les groupes de traitement, soit différents qui, ensemble ( P = 0,939, test de l'échantillon multiple) ou entre les deux groupes ( P > 0,05).

Figure 5.  Effet d'un stage de 3 semaines de traitement avec des combinaisons de ATO et CLI (25 +50, 50 +50 et 100 400 mg / kg / jour) sur la survie (Kaplan-Meier) de souris infectées de façon chronique avec déficit immunitaire DXM pendant 2 semaines. L'infection chronique a été établie par inoculation de 10 T. gondii kystes de la souche ME49 3 mois avant le traitement immunosuppresseur.

 

Augmentation de la survie chez les souris traitées avec l'un des ATO + CLI 25 +50, 50 +50 et 100 400 mg / kg / jour a été associée à des schémas avec une réduction significative des charges kyste (en tenant compte de toutes les souris meurent au cours du traitement / période d'observation ou tué à la fin de l'expérience) (Figure 6 a) par rapport aux souris non traitées ( P = 0,017, 0,0001 et 0,0001, respectivement).Toutefois, la comparaison des charges kyste entre la fin du traitement (jour 36) et la fin de la période d'observation 120 jour (Figure 6 b) ont montré que chez la souris sur chaque cycle de traitement des charges kyste a continué à diminuer au fil du temps, ce qui diminution très significative avec la dose la plus élevée régime ( P = 0,0003). En revanche, les charges de kystes chez les souris non traitées a augmenté au fil du temps ( P <0,0001). En conséquence, les comtes de kystes dans toutes les souris traitées, déjà réduit à la fin du traitement, étaient sept à 14 fois plus faible que chez les souris non traitées par jour 120 ( P<0,0001). Cela indique qu'un traitement de courte durée (3 semaines) avec des combinaisons de ATO et CLI a une longue durée (au moins 3 mois) effet sur ​​la formation de kystes renouvelé dans des souris immunodéprimées.

Figure 6.  kystes du cerveau (moyenne ± ÉCART-TYPE ) chez des souris immunodéprimées infectées de façon chronique avec DXM pendant 2 semaines et traités avec des combinaisons de ATO et CLI (AC1, AC2 et AC3, 25 +50, 50 +50 et 100 400 mg / kg / jour, respectivement) pendant 3 semaines (a) toutes les souris quel que soit le moment de la mort / sacrifice (* P <0,05 et *** P <0,001 versus contrôle souris) et (b) des souris tuées immédiatement après le traitement (jour 36) (barres blanches) et à la fin de l'expérience (jour 120) (barres noires) (*** P <0,001 entre points dans le temps). L'infection chronique a été établie par l'inoculation de 10 kystes de la souche ME49 de T. gondii 3 mois avant le traitement immunosuppresseur. Ø, de contrôle (non traités infectés immunodéprimés) chez la souris.

 

Discussion

Les résultats présentés ici démontrent clairement l'anti- T. gondiiactivité de la combinaison de l'OVA et de CLI infection murine induite avec une souris non-virulent (type-2) la souche parasite. Dans tous les modèles, c'est à dire dans la toxoplasmose aiguë, chronique et réactivé, les médicaments combinés ont été efficaces en termes de survie significativement augmenté et diminué des charges kyste au cerveau comparativement à aucun traitement.

Chez les souris infectées de façon aiguë, cependant, le traitement avec des combinaisons de l'OAB et de la CLI, en plus de protéger 100% des souris, considérablement réduit le fardeau kyste par rapport au traitement avec CLI seul, mais pas avec ATO seul, indiquant que dans ce modèle le plus composante efficace de la combinaison était ATO. Seul ou combiné avec CLI ATO considérablement réduit le fardeau kyste au cerveau, qui est restée extrêmement faible semaines après le traitement, même en dessous de 10 dans certains pays, comme le montre leur absence apparente à l'examen direct. Cependant, les essais biologiques positifs dans tous ces cas indiquent que les médicaments semblent, du moins dans les conditions expérimentales utilisées (durée de traitement de la toxicomanie, des doses), incapables d'éradiquer le parasite.

D'autre part, chez les souris infectées de façon chronique, ATO combiné avec CLI réduit de façon significative la charge kyste au cerveau par rapport non seulement avec l'absence de traitement, mais aussi avec n'importe quel médicament seul. Un fort effet des médicaments combinés, par opposition à une réduction similaire négligeable de la charge parasitaire par chaque médicament seul, compte tenu de l'activité connue de l'OAB contre les kystes, reflète sans doute l'histoire naturelle de l'infection par la souche ME49, cette souche a tendance continue pour donner lieu à la formation de kystes nouveau, probablement précédée par la rupture du kyste et la prolifération des tachyzoïtes qui sont ensuite convertis en bradyzoïtes; CLI est active contre les tachyzoïtes, la réduction de leur nombre et donc la réduction du nombre de kystes néoformés.

L'écart entre l'effet de l'OAB dans l'infection aiguë, où il réduit le fardeau kyste au cerveau comparable aux médicaments combinés, et sa partie inférieure d'efficacité en 3-month-old infections chroniques, peut être expliqué par l'OAB étant plus efficace contre métaboliquement actives bradyzoïtes immatures que contre les adultes. 8

Plus important encore, ATO combiné avec CLI ont montré une activité dans des modèles de corticoïde induite par le médicament recrudescence de T. gondii , comme le montre une augmentation significative des charges kyste au cerveau chez les souris immunodéprimées. Cette activité dépend directement de la posologie du médicament et, indirectement, sur le degré d'immunosuppression. Dans l'immunosuppression induite par le pré-traitement à la fois DXM et CA, la survie était plus faible et kyste au cerveau pèse plus élevé que chez les souris réprimées avec DXM seul. Les plus faibles doses de médicaments nécessaires pour obtenir un effet protecteur étaient ATO 25 et CLI 50 mg / kg / jour, ce qui est similaire à ce que nous avions montré dans l'infection induite par la souche RH de T. gondii . 22 Durée de l'administration du médicament corticoïde constitue une variable importante du protocole immunosuppresseur. Ainsi, chez les souris prétraitées avec DXM pour 2 à 3 semaines, les cours du traitement par ATO + CLI 50 +50 mg / kg / jour protégée 67% et 30%, respectivement.Par conséquent, le traitement était plus susceptible de réduire la charge parasitaire en dessous des niveaux critiques lorsqu'ils sont lancés après 2 plutôt que 3 semaines d'administration DXM. Ceci est cohérent avec l'état DXM induite par la libération des parasites de les kystes préexistants et la formation de nouveau kyste dès après 6-12 jours de l'administration. 25 Une autre observation importante est que, lorsqu'il est administré à des doses efficaces, les effets de combinaisons de ATO et CLI sont à long terme, comme le montre la tendance des charges kyste au cerveau, qui augmentent au fil du temps chez les souris non traitées, pour continuer à diminuer pendant des mois après la fin du traitement. Sans chercher à spéculer sur les raisons sous-jacentes, ce résultat peut être de la plus grande importance d'un point de vue clinique.

Même plusieurs fois kyste charges inférieures n'étaient pas toujours statistiquement significative, en raison, comme mentionné, les écarts types au niveau, qui reflètent probablement les variations du nombre de bradyzoïtes au sein de kystes initiaux (entre quelques centaines et plusieurs), 26 et suivants de la variabilité dans la formation de kystes nouveau.

En conclusion, l'efficacité démontrée de l'OAB associé à l'infection murine CLI avec une souche kystogène de T. gondii , pris ensemble avec nos constatations antérieures de l'activité synergique de la combinaison même médicament contre l'infection provoquée par la souche RH, montre clairement l'anti- T. gondii potentiel de cette association médicamenteuse. Dans la mesure où les résultats des modèles animaux peuvent être extrapolés à la situation humaine, étant donné que l'OAB est généralement bien toléré 13 , 14 et, en outre, que la combinaison des médicaments peuvent être utilisés à des doses plus faibles que lorsqu'il est utilisé seul, ce qui peut réduire la défavorables rares effets secondaires de la CLI, 16 , 17 de la combinaison de l'OAB et CLI peuvent offrir une alternative efficace mais sans danger pour le traitement de la toxoplasmose chez les individus immunocompétents et immunodéprimés à la fois, ce qui garantit une évaluation clinique.

Remerciements

L'assistance technique excellent de Mme Jordanka Djurović est reconnu.Ce travail a été soutenu par le Ministère de la Science, de la Technologie et du Développement de la République de Serbie (subvention no. M 1474). L'atovaquone a été fournie à OD-D. à titre d'enquêteur GlaxoWellcome externe (réf.. MR 93599). Les résultats de cette étude ont été présentés dans le cadre du symposium international sur les infections Douzième à l'hôte immunodéprimé, Bergen, Norvège, 23-26 Juin 2002.

 

Notes

  •  * Auteur correspondant. Tel: +381-11-685788 Télécopieur: +381-11-643691; E-mail: olgicadj@imi.bg.ac.yu

  •  § Present address. Institut de Génétique Humaine, Am Hubland, Biozentrum, 97074 Würzburg, Allemagne.

Références

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